桂花C4H基因的克隆与表达特性分析

摘要：

利用转录组测序获得的表达序列信息,结合RACE技术,从桂花(Osmanthus fragrans)花瓣中克隆到两个参与苯丙烷代谢第2步反应的肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因.其ORF全长分别为1518bp和1611bp,各自编码505和536个氨基酸,命名为OfC4H1和OfC4H2(登录号分别为KR861466、KF254842).系统进化树表明,OfC4H1与矮牵牛中的PhC4H1、PhC4H2等C4H蛋白聚为一类,属于Class Ⅰ类型;OfC4H2与金银花中的LjC4H等属于Class Ⅱ类型.进一步的C4H蛋白序列多重比较发现,OfC4H1和OfC4H2蛋白具有该基因家族特有的保守结构域,在这些保守结构域中存在区别两类C4H蛋白的典型特征.利用Real-time PCR比较分析了OfC4H1和OfC4H2基因的时空表达模式,结果显示,OfC4H1在花瓣中的表达量最高;OfC4H2在花瓣中的表达量较低,在花梗、雌蕊和幼叶等组织中表达量较高.构建原核表达载体pET6xHN-C4Hs,转化Transetta (DE3)大肠杆菌并诱导表达的结果表明,目的蛋白能在原核表达系统中顺利表达,而且与预期大小一致,但因溶解度较低无法进行酶活性分析.

关键词：桂花、肉桂酸4-羟基化酶、黄酮类化合物、原核表达、基因表达

所属期刊栏目：43

分类号：S685.13(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：教育部博士点基金项目20130146110022;黄冈师范学院项目2015TD02

在线出版日期：2016-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：525-537