甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究

摘要：

为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM 12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E coli BL21 (DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7.为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM 12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致.同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM 12-2-、CaM 12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM 12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用.结果表明CaM 12 EF-hands突变体CaM 12-2-、CaM 12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用.该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据.

关键词：结球甘蓝、CaM12、S位点受体激酶(SRK7)基因、原核表达、酵母双杂交

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分类号：S635.1(蔬菜园艺)

资助基金：国家自然科学基金项目31071802,31000908;重庆市自然科学基金重点项目2011BA1002;中央高校基本科研业务费专项XDJK2012B020;国家重点基础研究发展计划973计划项目2012CB113900

在线出版日期：2014-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2429-2440