罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达
从罗汉果(Siraitia grosvenorii)转录组中获得一条与罗汉果甜苷V生物合成相关的葡萄糖基转移酶(UDPG)的unigene片段,以罗汉果授粉后70 d的果实RNA为模板,利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因,将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上,构建融合表达载体,转化到大肠杆菌BL21 (DE3),通过IPTG诱导表达,重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物.结果表明,获得了1条SgUDPG1,全长为l 959bp,开放阅读框ORF为1 365 bp,编码1条454aa的肽链,理论分子量为51.2 kD,等电点为5.39,具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-box motif. SgUDPG1在授粉后50 d和70 d的果实中表达逐渐升高,是对照授粉后3d的5.16倍和13.12倍,与果实中甜苷V含量呈相同趋势.此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达,并且可以纯化出比理论分子量大5.3 kD的融合蛋白,通过Western-blotting和质谱鉴定,确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶.
罗汉果、葡萄糖基转移酶、RACE、原核表达、融合蛋白
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S567.23+9(经济作物)
国家自然科学基金项目30960500;国家‘十二五’科技支撑计划项目2011BA101B03;广西自然科学基金项目2013GXNSFBA019170;广西卫生厅中医药科技专项项目GZPT1235;广西研究生科研创新项目T32560
2013-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共10页
1195-1204
