番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因原核表达蛋白的抗血清制备及其检测应用

摘要：

以受番木瓜环斑病毒（Papaya ring spotvirus，PRSV）侵染的番木瓜（Carica papaya）叶片为供试材料，采用RT—PCR方法克隆其外壳蛋白基因印，并将其连接到原核表达载体pET-28b（＋）上，酶切鉴定及克隆测序确定开放阅读框的正确性，将获得的重组质粒转化大肠杆菌表达宿主菌。通过摸索转化的表达宿主菌种类、IPTG浓度及诱导时间，获得高效表达PRSVcp的条件。SDS-PAGE分析结果表明，CP融合蛋白分子量为36．8kD。以Ni2＋-NTA亲和层析柱纯化的融合蛋白为抗原，免疫注射新西兰大白兔制备得到高效价抗体，间接ELISA测定效价为1：16384。Western blot检测结果表明，制备的抗血清可与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。通过ID-ELISA检测田间样品证实了制备的抗血清与PRSV侵染病叶发生了良好的特异性反应。本试验为PRSV的快速检测以及PRSV编码蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：番木瓜、番木瓜环斑病毒、外壳蛋白基因(cp)、原核表达、抗血清制备

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分类号：S667.9(果树园艺)

资助基金：广东省自然科学博士启动基金项目10451064001006063;广东省农业科学院院长基金项目1279009475432

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1457-1464