平邑甜茶MhVPE基因ihpRNA干扰载体的构建及转拟南芥验证
根据平邑甜茶液泡加工酶（vacuolar processing enzyme）基因MhVPE（GenBank登录号为FJ891065）cDNA序列,设计两对含有酶切位点的特异性引物F1/F2和R1/R2,以pMD-MhVPE质粒为模板,分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段pMD-F和pMD-R。将该正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置,构建成了含有内含子发夹结构的ihpRNA表达载体pART-RNAi-MhVPE。通过农杆菌介导,用花序浸泡法转化拟南芥进行验证,经过抗性筛选和PCR检测,得到17株转基因阳性植株;半定量RT-PCR结果显示所获得的转基因拟南芥植株中AtVPE同源基因的表达量明显降低,表明该干扰载体能够有效抑制VPE基因的表达,MhVPE基因的ihpRNA干扰载体构建成功,为进一步鉴定该基因的功能奠定了基础。
平邑甜茶、MhVPE、RNA干扰、ihpRNA、拟南芥
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Q943.2(植物学)
国家自然科学基金项目31171923;国家转基因生物新品种培育重大专项2008ZX08009-3;高校博士学科点专项科研基金项目20103702110003;山东省自然科学基金项目ZR2010CM020
2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
2365-2372
