马铃薯类病毒cDNA双体探针的研制及其在检测上的应用

摘要：

在马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)基因组中BamH Ⅰ位点处(87～92 nt),设计两对含有BamH Ⅰ重叠区(overlop)的引物.将PCR扩增获得的全长PSTVd分别插入到pGM-T载体中.通过BamH Ⅰ位点,将两个PSTVd单体连接,构建了PSTVd双体载体.以此载体为模板,通过PCR标记技术,制备了高灵敏高专化的PSTVd双体cDNA地高辛标记探针.以CDP-Star为反应底物进行化学发光反应结果判读,建立了PSTVd的高效杂交检测体系.该体系可以对马铃薯薯块、叶片、芽等不同组织样品进行检测,检测灵敏度达到0.05 pg.通过对67份田间采集的样品和实验室保存的资源材料进行检测,比较了cDNA双体探针核酸斑点杂交技术(nucleic acid spot hybridization,NASH)、反转录聚合酶链式反应(reverse-transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR)和往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳(return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE)检测技术的阳性样品检出率,结果显示,NASH技术阳性样品检出率为67.7%,与RT-PCR相一致,高于R-PAGE技术的阳性检测率(53.7%).

关键词：马铃薯、马铃薯纺锤块茎类病毒、探针、双体、核酸斑点杂交

所属期刊栏目：36

分类号：S532(薯类作物)

资助基金：国家科技部基础研究重大项目2004ccc02900;黑龙江省科技攻关重大项目GA08B102;黑龙江省青年基金Qc03c05

在线出版日期：2009-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1538-1544