镉对小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响及EGTA的保护作用

摘要：

采用体外培养的方法,利用精子活力分析软件(CASA)、蛋白免疫印迹(WB)及免疫荧光技术,探讨镉(Cd)对小鼠精子活力参数、蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响,并对小鼠精子酪氨酸磷酸化蛋白进行细胞亚组分定位.结果表明:Cd对小鼠精子活力具有明显抑制作用,且随着Cd浓度的增加抑制作用增强,当Cd浓度达到1.0 μmol·L-1时,小鼠精子活力(MOT)显著低于对照组;同时,Cd促进小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化,当浓度≥1.0 μmol·L-1时,尤其分子量约为55 kDa的蛋白酪氨酸磷酸化程度显著增强,且免疫荧光结果显示主要集中在小鼠精子中段;当用30 μmol·L-1乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)和10μmol·L-1 Cd同时培养时,55 kDa蛋白并未发生明显的酪氨酸磷酸化修饰,而且小鼠精子活力变化不显著.表明Cd可能是通过诱导中段55 kDa蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰从而抑制精子活力,EGTA能螯合Cd离子并有效防止其毒性作用.研究证实,Cd诱导精子特异性蛋白酪氨酸磷酸化增强,进而抑制精子活力.EGTA可以用于体外控制Cd进入细胞的阻断剂,为Cd繁殖毒性分子机制的研究提供了研究手段.

关键词：重金属、信号通路、繁殖毒性、阻断剂

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资助基金：本文由上海市科技兴农攻关项目2014-2-5和上海交通大学国家级大学生科创项目12166资助;This work was supported by the Key Project of Shanghai Municipal Agricultural Commission 2014-2-5 and Shanghai Jiaotong University National Students' Science and Technology Innovation Project 12166.

在线出版日期：2017-01-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4045-4051