竹叶花椒提取物抑制大鼠肝细胞BRL3A自噬而诱导ROS累积

摘要：

目的 研究竹叶花椒甲醇提取物(ZADCM)对BRL 3A细胞自噬水平与活性氧(ROS)生成量的影响.方法 体外培养BRL 3A细胞,将其与ZADCM(70 μg·mL-1)处理 3、6、12、24 h或不同浓度的ZADCM(30、50、70 μg·mL-1)孵育 24 h,干预给药用 3-甲基腺嘌呤(10 mmol·L-1)、二甲双胍(2.5 mmol·L-1)处理;采用CCK-8 法检测BRL 3A细胞存活率,流式细胞术检测 BRL 3A 细胞内 ROS 生成量,免疫荧光法观察自噬标志性蛋白 LC3B 的荧光强度,Western blotting检测p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin-1和LC3B蛋白的表达.结果 不同浓度ZADCM处理 24h后,与正常对照组比较,免疫荧光结果显示LC3B荧光强度降低;ZADCM(70 μg·mL-1)处理 12 或 24h后,Western blotting结果显示,LC3B和Beclin-1蛋白表达水平均降低(P<0.05 或P<0.01),p-mTOR2448/mTOR、p-ULK1757/ULK1 均显著升高(P<0.05).激光共聚焦结果显示ROS灶点增加,且流式细胞术结果显示,药物处理组的ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);采用 3-甲基腺嘌呤或二甲双胍干预后,与药物处理组比较,细胞内ROS升高或降低,自噬相关蛋白表达降低或升高,ZADCM组BRL 3A细胞存活率降低或升高.结论 ZADCM可能通过激活BRL 3A细胞内mTOR/ULK1 信号通路,抑制细胞自噬,并伴随ROS累积,引起细胞活力下降.

关键词：竹叶花椒、肝细胞、自噬、活性氧

所属期刊栏目：42

分类号：R285(中药学)

资助基金：四川省科技厅应用基础研究项目;成都中医药大学杏林学者学科人才科研提升计划

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1436-1442