脂多糖对U251细胞内芳烃受体和核受体NR4A1表达的抑制作用及其机制

摘要：

目的 探讨脂多糖对U251细胞内核受体NR4A1表达的抑制作用及其分子机制.方法 U251细胞分别给予二甲亚砜、脂多糖、脂多糖联用Toll样受体4(TLR4)抑制剂CLI-095或髓样分化因子(MyD88)抑制剂ST 2825处理24 h.采用基因工程技术,体外构建人源芳烃受体(AhR)和芳烃受体核转位蛋白(ARNT)表达质粒,构建人源NR4A1启动子片段的荧光素酶报告质粒,U251细胞瞬时转染人源AhR和ARNT表达质粒,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR4A1、AhR和ARNT的表达;293T细胞瞬时转染人源AhR和ARNT表达质粒以及人源NR4A1启动子片段的荧光素酶报告质粒,双荧光素酶报告实验检测荧光强度.染色质免疫共沉淀分析检测脂多糖对AhR蛋白与NR4A1启动子位点结合的影响.结果 与二甲亚砜比较,脂多糖呈剂量依赖性下调NR4A1和AhR的表达(P<0.05);与单用脂多糖比较,CLI-095显著逆转了脂多糖对NR4A1和AhR mRNA表达的下调作用(P<0.01),ST 2825部分逆转了其表达下调(P<0.05).qRT-PCR结果显示,转染后U251细胞内AhR/ANRT的高表达显著诱导了NR4A1的表达,上调2.63倍(P<0.01);双荧光素酶报告实验分析显示,转染后293T细胞荧光强度明显增加,上调19.08倍(P<0.01).染色质免疫共沉淀分析,与二甲亚砜比较,脂多糖显著抑制了AhR蛋白与NR4A1启动子位点的结合,下调32.7％(P<0.05).结论 脂多糖通过TLR4-MyD88信号通路抑制U251细胞AhR的表达,抑制AhR/ARNT形成的异源二聚体与NR4A1启动子位点的结合,进而在转录水平上抑制了NR4A1的表达.

关键词：脂多糖;核受体NR4A1;芳烃受体

所属期刊栏目：40

分类号：R971.5;R965(药品)

资助基金：湖北省卫生健康委员会指导性项目;十堰市科学技术研究;开发项目计划

在线出版日期：2021-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1183-1188