大鼠脊髓神经元细胞核中TET3与OGT相互作用的分析与鉴定

摘要：

目的 分析与鉴定大鼠脊髓神经元细胞核中10-11易位蛋白3(TET3)与氧连氮-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)的相互作用.方法 原代培养大鼠脊髓神经元并提取总RNA,采用RT-PCR法获得TET3和OGT基因片段.采用DNA重组技术在TET3、OGT蛋白编码序列的羧基端融合Flag和HA标签蛋白,构建pcDNA3.0-TET3-Flag-HA和pcDNA3.0-OGT-Flag-HA重组融合蛋白质粒,经双酶切验证后分别转染大鼠脊髓神经元.48 h后提取神经元核蛋白,采用Western blot法验证融合蛋白TET3-Flag-HA和OGT-Flag-HA;采用串联亲和纯化法富集与TET3或OGT结合的蛋白复合物,经电泳分离和质谱分析筛选出与TET3或OGT相互作用的候选蛋白,并采用免疫共沉淀进行验证.结果 证实重组融合蛋白质粒pcDNA3.0-TET3-Flag-HA和pcDNA3.0-OGT-Flag-HA构建成功,融合蛋白TET3-Flag-HA和OGT-Flag-HA在大鼠脊髓神经元细胞核中表达.在大鼠脊髓神经元细胞核中,与TET3相互作用蛋白是OGT,与OGT相互作用蛋白包括TET3和视网膜母细胞瘤结合蛋白5.结论 TET3与OGT在大鼠脊髓神经元细胞核中形成复合体,可能参与调控相关功能蛋白的转录表达.

关键词：脊髓、神经元、10-11易位蛋白、氧连氮-乙酰葡萄糖胺转移酶

所属期刊栏目：20

分类号：R744(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金;福建省科技对外合作项目

在线出版日期：2023-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-11