CD20嵌合抗体的构建、表达及纯化的实验研究

摘要：

目的 构建CD20嵌合抗体,检测其活性并纯化该嵌合抗体.方法 从杂交瘤细胞株中分别扩增抗鼠CD20抗体的轻链和重链基因的可变区,并与人的轻链和重链恒定区连接,分别克隆到pTY5真核表达载体,然后共转染293E细胞,通过RT-PCR检测mRNA的转录,夹心ELISA检测抗体表达量,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合特异性.结果 正确扩增得到抗CD20人鼠嵌合抗体的轻链和重链基因片段并成功构建重组真核表达载体pTY5-CD20H和pTY5-CD20L,在293E细胞中进行瞬时表达,RT-PCR显示抗体基因在细胞中进行了成功的转录,ELISA测定抗体表达量在15～24 ng/mL之间,流式检测结果证实细胞上清分泌的抗CD20嵌合抗体可与NS-1细胞株结合,并通过protein A柱亲和层析获取高纯度的抗CD20嵌合抗体.结论 成功构建表达抗CD20嵌合抗体的载体,且表达的抗体具有结合活性,为下一步研究慢性荨麻疹的发病机制及治疗打下基础.

关键词：CD20、嵌合抗体、慢性荨麻疹、自身免疫疾病

所属期刊栏目：9

分类号：R593(全身性疾病)

资助基金：广东省广州市科技支撑计划项目2009Z1-E011

在线出版日期：2013-01-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：10-12,14