柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)特异的TaqMan 一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法.方法 根据 CV-B5 的 VP1 序列,设计特异性引物和TaqMan探针.将目的基因插入pMD18TM载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价.结果 该方法在103～1011拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r2＞0.99),扩增效率E=100.9％,敏感度达1 × 103拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好.结论 本实验建立的TaqMan 一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析.

关键词：柯萨奇病毒B组5型、实时荧光定量聚合酶链反应、TaqMan探针法

所属期刊栏目：53

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：云南省科技计划项目202202AA100016

在线出版日期：2024-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：84-88