microRNA-140真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建miR-140真核表达载体并检测其在兔软骨细胞中的表达情况.方法 以人全血标本基因组为模板,PCR扩增出带有酶切位点的miR-140序列,将该序列定向克隆入pBudCE4.1载体中,构建pBudCE4.1-miR-140真核表达载体.将核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide,NNS)修饰的壳聚糖(NNSCS)分别与pBudCE4.1-miR-140重组质粒及pBudCE4.1空质粒形成纳米复合物,分别瞬时转染体外分离培养的正常兔原代关节软骨细胞,实时荧光定量PCR方法检测miR-140的表达情况.结果 构建的pBudCE4.1-miR-140真核表达质粒酶切鉴定和测序结果均正确,表明miR-140成功克隆入pBudCE4.1载体中.实时荧光定量PCR结果表明,与NNSCS/pBudCE4.1对照组相比,NNSCS/pBudCE4.1-miR-140转染组软骨细胞中miR-140表达升高约14.5倍(P＜0.05).结论 成功构建了pBudCE4.1-miR-140真核表达载体,瞬时转染后软骨细胞可以有效地高表达miR-140,为将来探究miR-140在软骨损伤修复中的作用机制奠定了基础.

关键词：microRNA-140、软骨细胞、真核表达载体、定量PCR

所属期刊栏目：46

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81301737;山东省自然科学基金资助项目ZR2015HL025,ZR2012HQ034

在线出版日期：2017-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：35-38,30