慢病毒介导不同启动子嵌合抗原受体CD19在T细胞中的表达

摘要：

目的 高效包装含绿色荧光蛋白(GFP)的嵌合性抗原受体CD19重组慢病毒载体,对比不同启动子在T细胞中绿色荧光蛋白的表达效率.方法 构建3种不同启动子及CD19-CAR的质粒pHAGE-CMV-EF1α-GFP-CD19、pHAGE-CMV-GFP-CD19、pHAGE-EF1α-GFP-CD19,转染293T细胞,镜下观察转染的细胞状态,72h后收集上清,PCR定量病毒载体RNA核酸拷贝数,通过流式细胞术以及Western blot法测定单、双启动子启动GFP及CD3ζ的表达情况;慢病毒液分别转染T淋巴细胞后,通过荧光显微镜检测慢病毒转染效果,Western blot法测定蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜观察:以293T细胞为靶细胞时,启动子由强到弱依次为CMV-EF1α＞CMV ＞EF1α,流式结果显示,在293T细胞中的转导率分别为72.4％、20.6％、14.5％;Western blot法检测结果显示,在T细胞中启动子表达强弱为CMV-EF1α ＞EF1o＞CMV.结论 在以重组慢病毒为载体的基因研究过程中,为了提高病毒在感染细胞的转染率,需要正确选择启动子以及相应的靶细胞.

关键词：启动子、绿色荧光蛋白、重组慢病毒载体、T淋巴细胞

所属期刊栏目：46

分类号：R3(基础医学)

资助基金：湖北省自然科学基金资助项目2013CFB244

在线出版日期：2017-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：92-98