利用CRISPR-Cas9系统建立Prmt1敲除的小鼠胚胎干细胞系

摘要：

目的 利用CRISPR-Cas9系统构建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干细胞系,并分析验证其敲除效果.方法 利用第3代基因编辑技术CRISPR-Cas9系统,针对Prmt1第4、5、6、7外显子设计4条gRNAs,gRNA两两组合转染E14细胞,特异性的敲除E14细胞中的Prmt1,并在蛋白质水平,mRNA水平和基因组水平分别验证敲除效果.结果 与对照组相比,两组敲除实验组都检测不到Prmt1蛋白质和mRNA的表达,基因组测序结果分析显示,两实验组中Prmt1的mRNA均出现无义突变,使其mRNA的翻译异常终止.同时,实时定量PCR结果显示,精氨酸甲基转移酶家族其他成员Prmt2,Carm1和Prmt6 mRNA表达不受影响.结论 成功获得特异性敲除Prmt1的E14细胞系,为研究Prmt1在胚胎干细胞中的作用提供了重要工具.

关键词：CRISPR-Cas9、Prmt1、小鼠胚胎干细胞

所属期刊栏目：44

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金资助项目90919048;国家教育部博士点基金资助项目20111106110024

在线出版日期：2016-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：18-22,29