应用实时荧光定量PCR检测血清miR-122和miR-22 及其在慢性乙型肝炎患者中的表达

摘要：

目的 建立血清中microRNA( miRNA)的实时荧光定量PCR( qRT-PCR)的检测方法,对慢性乙型肝炎患者血清中miR-122和miR-22的表达水平进行检测和分析,探讨其在慢性乙型肝炎患者血清中表达的意义. 方法 茎环引物用于成熟型miRNA反转录,以建立SYBR Green ⅠPCR筛选和定量检测miRNA的方法. 同时,采用10倍梯度稀释的miR-122标准品cDNA(1~109 拷贝/微升)评价其敏感度;采用熔解曲线评价其检测miRNA的特异性;通过对2 ×105、2 ×106、2 ×107 拷贝/微升的miR-122标准品cDNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值( Ct)的变异系数( CV)评价其精密度. 采用建立的qRT-PCR技术检测慢性乙型肝炎患者及正常人血清中miR-122和miR-22的表达水平. 结果 建立了茎环引物的RT-PCR法检测血清中的miRNA,该方法的线性范围宽,敏感度高,重复性好,方法简便. 在慢性乙型肝炎患者组中血清miR-122和miR-22的相对表达量分别为17.88和5.35;与正常对照组中血清miR-122和miR-22的相对表达量(分别为1.80和1.67)比较,差异有统计学意义( P均=0.000). 结论 建立了茎环引物RT-PCR实时荧光定量PCR方法检测血清中的miR-122和miR-22,血清miR-122和miR-22在慢性乙型肝炎患者的血清中表达显著升高.

关键词：miR-122、miR-22、慢性乙型肝炎

所属期刊栏目：44

分类号：R512(传染病)

在线出版日期：2015-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：121-124