一种大鼠主动脉内皮细胞分离培养的改良方法

摘要：

目的 探索一套原代培养大鼠主动脉内皮细胞( RAEC)简单实用的方法体系.方法 SD大鼠两只,无菌环境下分离胸腹主动脉,清除脂肪、结缔组织.显微剪剪开主动脉,内膜面向下贴附于少量Ⅰ型胶原酶上消化60min.离心收集内皮细胞置于1％明胶包被的六孔板,加入20％胎牛血清的M199中培养.3～4天后换液更换内皮细胞培养基(ECM)培养.当细胞长满约90％底面积时,玻璃探针机械剔除成纤维样细胞后传代.倒置显微镜和抗Ⅷ因子抗体对细胞分别做形态学和免疫细胞化学鉴定.结果 原代培养3～4天时,少量细胞开始贴壁并分裂生长.更换ECM后细胞增殖迅速,培养8～10天时可见细胞长满90％左右的底面积,呈典型的“铺路石”或“鹅卵石”征.免疫细胞化学鉴定表明在分离培养的内皮细胞中有特定Ⅷ因子表达.原代周期8～10天,传代周期3～4天,经纯化传代后纯度接近100％.传至第6代仍未见细胞分裂增殖活性下降.结论 本实验体系培养RAEC简单有效,重复性良好.获得细胞数量多、纯度高,有利于实验人员掌握.

关键词：大鼠、主动脉、内皮细胞、原代培养

所属期刊栏目：41

分类号：R39;R97

资助基金：卫生部科学研究基金-浙江省医药卫生重大科技计划项目WKJ2011-2-018;浙江省自然科学基金资助项目Y2100535;绍兴市科技计划项目2011A23011

在线出版日期：2013-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：67-71