用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法的建立及验证

摘要：

目的 建立和验证用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法.方法 针对CMV启动子序列设计探针和引物,用SYBR Green I熔解曲线分析引物扩增的特异性.对反应体系进行系统优化.用含CMV启动子的基因治疗产品和质粒标准品验证建立的PCR方法.结果 上游引物为5′-AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT-3′,下游引物为5′-CGTATTAGTCATCGC-TATTACCATGGT-3′,探针为5′- AACCGCTATCCACGCCCATTGATG -3′.扩增的特异性较强,反应体系优化后能达到较高的灵敏度.Ct值的变异系数都小于2％.标准曲线的定量范围为1.5×102～ 1.5×107拷贝,灵敏度为30拷贝.质粒标准品和基因治疗产品的扩增效率相近.结论 建立了检测CMV启动子序列的绝对定量PCR方法.

关键词：实时定量 PCR、优化、CMV启动子、质粒

所属期刊栏目：41

分类号：R73;R3

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项基金资助项目2008ZX09305-002

在线出版日期：2013-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：46-48