利用细菌荧光素酶建立酶联免疫吸附试验检测抗-HBs的研究

摘要：

目的利用细菌荧光素酶作为示踪物,建立一种灵敏度高、特异性强、性能稳定、操作简便、无环境污染的生物发光酶酶联免疫检测技术(Bioluminescent enzyme linkedimmunosorbent assay BELISA).方法用戊二醛作为交联剂,将细菌荧光素酶标记到乙型肝炎表面抗原上,使酶标记物具有酶和抗原的双重活性,采用双抗原夹心法检测.结果最适的标记条件为:细菌荧光素酶与乙型肝炎表面抗原的比例2:1,pH值7.0,反应温度室温(22℃),反应时间2小时,0.1%戊二醛用量50μl/ml标记物.所建立的生物发光酶酶联免疫试验检测抗-HBs灵敏度2.5mIU/ml,变异系数(CV)＜15%.与抗-HAV·IgM阳性血清、抗-HCV阳性血清无交叉反应,阻断试验成立.对200份抗-HBs阴性血清(RIA-、ELISA-)进行BELISA检测,确定抗-HBs阴性血清光量子数为50MV/20s.对98份抗-HBs阳性血清(RIA+)进行BELISA和ELISA检测,BELISA检出98份阳性,与RIA符合率100%,而ELISA与RIA的符合率为89.9%,可见BELISA灵敏度与RIA相同.结论用细菌荧光素酶为示踪物建立的生物发光检测技术灵敏度高,特异性强,可取代放射免疫分析和以辣根过氧化物酶为示踪物建立的酶联免疫检测技术.

关键词：细菌荧光素酶、酶联免疫吸附试验、抗-HBs

所属期刊栏目：32

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：9-12