CELL-SELEX筛选膀胱癌核酸适配体的细胞学研究

摘要：

目的 基于膀胱癌标志物的早期诊断和术后复发监测方法 是目前的研究热点.文中利用CELL-SELEX技术筛选出可特异性识别膀胱癌细胞系(EJ、T24、BIU87)的核酸适配体.方法 以人膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87为阳性质控细胞,以HCV29(人正常尿路上皮细胞系)、293T(人胚肾细胞系)、huh7(人肝癌细胞系)为阴性质控细胞,进行CELL-SELEX筛选.PCR上游引物5'端标记FITC,下游引物5'端标记Biotin,将每一轮次筛选得到的ssDNA作为模板进行PCR扩增、纯化.利用生物素-链亲和素磁珠分离法将PCR纯化产物进行分离后获得次级FITC-ssDNA用于下一轮次的筛选,流式细胞仪监测CELL-SELEX筛选进程.选取与膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87结合率最高轮次的ssDNA文库进行PCR扩增、产物纯化、分子克隆和测序;根据测序结果 ,利用Dnaman软件模拟核酸适配体的二级结构.体外合成FITC标记的适配体,流式细胞仪检测适配体与EJ、T24和BIU87的结合率.结果 随着CELL-SELEX流程的推进,FITC-ssDNA与EJ、T24和BIU87细胞的结合率逐渐增加;第15轮FITC-ssDNA与EJ结合率最高,文库中apt1富集度最高;第18轮FITC-ssDNA与T24、BIU87结合率最高,文库中apt2和apt3富集度最高.DNA结构预测分析显示apt1、apt2和apt3的二级结构主要为茎环结构.流式细胞仪检测:FITC-apt1可特异性识别EJ细胞,阳性率达71.5％.FITC-apt2与T24细胞的结率明显高于BIU87细胞.FITC-apt3与BIU87细胞的结合率明显高于T24细胞.FITC-apt2可特异性识别T24细胞,阳性率达63.9％.FITC-apt3可特异性识别BIU87细胞,阳性率达74.7％.结论 利用CELL-SELEX技术筛选出可识别膀胱癌细胞系的适配体.其中适配体apt1可特异性识别EJ细胞,适配体apt2可特异性识别T24细胞,适配体apt3可特异性识别BIU87细胞,为膀胱癌早期诊断和靶向治疗技术的研发提供了实验依据.

关键词：CELL-SELEX、膀胱癌、适配体

所属期刊栏目：33

分类号：R737.14(肿瘤学)

资助基金：云南省科技惠民计划项目;云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目[2017FE467

在线出版日期：2020-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：708-714