色素上皮衍生因子的分段克隆表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响

摘要：

目的 有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道.文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响. 方法 采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的片段用NheⅠ/HindⅢ酶切,插入至pET28a(+)载体.连接产物转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,并把融合蛋白的进行分离、纯化.采用CCK-8方法检测24 h、48 h及72 h,不同浓度100、400、800和1000 nmol/LPEDF1、PEDF2和PEDF3肽段对SCL-1细胞增殖影响. 结果 成功构建PEDF1、PEDF2和PEDF3的原核表达载体,PEDF1、PEDF2和PEDF3融合蛋白,相对分子质量约为18 000、17 000和13 000.24 h时,800 nmol/L、1000 nmoYL浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.61±0.03)、0.78±0.07)]较0 nmol/L PEDF3 (1.00±0.00)明显降低(P＜0.05);48 h时,400、800、1000nmol/L浓度PEDF3SCL-1细胞增殖呈现显著抑制,并呈剂量依赖性(P＜0.05);72 h时,800、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.53±0.05)、(0.51±0.05)]较400、0 nmol/L[(0.60±0.05)、(1.00±0.00)]显著降低(P＜0.05). 结论 成功分段克隆表达PEDF融合蛋白,PEDF3抑制了SCL-1细胞增殖,为进一步筛选PEDF活性功能短肽提供了基础.

关键词：色素上皮衍生因子、人皮肤鳞状细胞癌、分段克隆、细胞增殖

所属期刊栏目：32

分类号：R739.5(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81960569;江西省教育厅科学技术研究项目GJJ170090

在线出版日期：2020-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1014-1018