葡萄糖-6-磷酸脱氢酶稳定敲低对肾透明细胞癌细胞迁移的抑制作用

摘要：

目的 肾透明细胞癌(ccRCC)是一种代谢性疾病,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与ccRCC的发生发展及患者的不良预后呈正相关.文章首次构建了G6PD缺陷型ccRCC稳定细胞株,检测其迁移表型.方法 OligoEngine RNAi设计针对人G6PD基因3′端非编码区的siRNA及无关siRNA序列,合成双链后通过BglⅡ和HindⅢ酶切位点插入pSP-GFP/Neo表达载体,构建Caki-1-G6PD siRNA细胞株及Caki-1-Negative control细胞株,进而转染并经G418筛选.应用Real-time RT-PCR、Western blot及酶活性方法,检测细胞株的G6PD表达和酶活性;Transwell方法检测细胞迁移表型、Western blot检测p-STAT3/STAT3表达.结果 荧光显微镜下可见Caki-1-G6PD siRNA细胞与Caki-1-Negative control细胞形态良好,通过GFP表达量计算细胞转染效率约为45％～55％;48 h后细胞贴壁密度达90％,荧光表达略有增强,转染效率可达60％.光镜和荧光显微镜下亦可见细胞状态良好,GFP阳性率达95％.与Caki-1-Negative control细胞相比,Caki-1-G6PD siRNA细胞的G6PD mRNA表达量蛋白表达量和酶活性均显著降低(P<0.05).与Caki-1-Negative control细胞相比,Caki-1-G6PD siRNA迁移细胞的相对数量明显降低[(64.0±4.2)个vs(30.0±2.9)个,P<0.01],p-STAT3/STAT3值亦明显下降[(0.45±0.05)vs(0.24±0.01),P<0.01].结论 文章首次成功构建了G6PD稳定敲低和迁移能力低下的Caki-1细胞系,其G6PD敲低所致ccRCC细胞迁移能力降低与STAT3信号相关.

关键词：G6PD、肾透明细胞癌、稳定细胞株

所属期刊栏目：31

分类号：R737.11(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81760455, 81160246, 81460421, 31660246;云南省科技计划项目[2017FE468-003;2018FE468-001;2017FE 468-132 , 2017FE468-141 ];云南省教育厅科学研究基金项目2015Y178

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：697-702