SD大鼠腺垂体细胞体外分离方法的比较

摘要：

目的 体外分离腺垂体制备主要包括酶消化及机械法等方法,但何种方法效果更好尚无相关报道.现比较大鼠腺垂体细胞体外分散制备的几种主流方法并对其进行促性腺激素分泌细胞鉴定,明确何种制备方法更为便捷高效.方法 将48只成年雌性SD大鼠按随机数字表法分为胰酶组(0.25％胰酶EDTA液消化)、Ⅳ型胶原蛋白酶组(Ⅳ型胶原蛋白酶消化)、机械分离组(200目细胞筛研磨)及胰酶+机械分离组(0.25％胰酶EDTA液消化+200目细胞筛研磨),每组12只.评价各种方法制备细胞的效果.培养各组原代细胞,动态观察各组细胞在体外生长的情况,并利用免疫细胞化学染色技术进行鉴定. 结果 与机械分离组细胞活率[(90.25±0.96)％]比较,胰酶组、胰酶+机械分离组[(94.11±1.71)％、(94.92±1.92)％]均升高;与Ⅳ型胶原蛋白酶细胞活率[(93.32±1.77)％]比较,胰酶组、胰酶+机械分离组亦明显升高(P＜0.05).形态学观察:各种方法制备的腺垂体细胞均呈圆形,折光性强,边缘完整清楚.培养16～24h候开始部分贴壁,至48～72h绝大部分细胞贴壁,早期腺细胞仍为圆形,体积较前减小,可见少量大体积的细胞散落分布其间.培养7d后,细胞变为多角形或梭形,并连接成片,至10d左右,纤维化逐渐明显;免疫细胞化学染色表明FSH阳性细胞体积较大,数量少,散在分布;其阳性产物位于细胞质内,呈蓝色;酶联免疫吸附试验测定细胞上清液证实离体细胞仍有激素分泌功能. 结论 对比单一制备细胞方法,胰酶消化+机械分离法具有一定优势;体外培养的垂体前叶细胞生长良好,分泌功能存在,可胜任相关科学实验.

关键词：SD大鼠、垂体前叶细胞、体外培养、免疫化学染色

所属期刊栏目：30

分类号：R36(病理学)

资助基金：国家自然科学基金81473713;中国和欧洲的医疗保健业发展合作研究计划FP7/2007-2013/PIRSES-GA-2013-612589;江苏省自然基金BK20141463;江苏省中医药局重大项目ZD201702

在线出版日期：2018-01-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1272-1276