人MTERF3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

摘要：

目的：人线粒体转录终止因子3（ mitochondrial transcription termination factor 3， MTERF3）是线粒体基因表达及能量代谢的负调控因子。文中旨在研究大肠埃希菌中原核表达MTERF3蛋白及制备鼠抗人MTERF3多克隆抗体。方法RT?PCR扩增人MTERF3基因 cDNA的完整开放阅读框，克隆至原核表达载体 pET28b，转化大肠埃希菌感受态细胞 BL21（ DE3），IPTG诱导6×his融合蛋白质表达，Ni2＋?NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组人MTERF3蛋白，以纯化的重组蛋白为免疫原免疫BALB／c小鼠制备其特异性多克隆抗体，用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测抗体的效价和特异性。结果成功在大肠埃希菌细胞中原核表达重组人MTERF3蛋白，并获得高质量的鼠抗人MTERF3多克隆抗体。 ELISA结果显示抗体的效价为1∶105，Western blot 和免疫荧光结果显示鼠抗人MTERF3能特异性识别天然的MTERF3抗原。结论原核表达的重组人MTERF3蛋白具有良好的免疫原性，其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和高度的特异性。人MTERF3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备为进一步研究人MTERF3的功能奠定了实验基础。

关键词：人线粒体转录终止因子3、原核表达、纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：29

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81560458，31601155；云南省教育厅科学研究基金2014Z126；大理大学博士科研启动基金 BSKY2012018；大理大学大学生创新创业计划项目2016058

在线出版日期：2016-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1020-1025