人转录因子 PU ．1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的： PU．1是调控肺泡巨噬细胞天然免疫功能的重要转录因子之一。文中旨在构建并鉴定表达人转录因子PU．1基因的重组腺病毒载体。方法将PU．1基因SPI1和真核表达载体pIRES-EGFP进行双酶切、连接酶连接，PCR扩增目的片段SPI1-IRES-EGFP，与中间质粒pDONR221和腺病毒骨架质粒pAd／CMV／V5-DEST进行重组，线性化后转染人胚肾293（HEK293）细胞，获得重组腺病毒pAD-SPI1-IRES-EGFP，经过大量扩增后获得高浓度的重组腺病毒。 TCID 50法测定重组腺病毒滴度，通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR（ Real-time qPCR）鉴定PU．1基因在HEK293细胞中的表达。结果菌落PCR、酶切电泳及测序结果均表明重组腺病毒携带有正确的PU．1基因，TCID 50法计算腺病毒滴度为8×1011 IU／mL，荧光显微镜下可见明显的绿色荧光，Real-time qPCR转染重组腺病毒组 PU．1 mRNA表达量是转染空病毒组的2189．93倍。结论成功构建并获得了高浓度的人转录因子PU．1基因重组腺病毒，为后续研究高表达PU．1在宿主抗烟曲霉感染中的天然免疫作用奠定了基础。

关键词：PU.1、SPI1、重组腺病毒、烟曲霉、天然免疫

所属期刊栏目：29

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81270064，81200063

在线出版日期：2016-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：465-469