Survivin shRNA 和 APC 片段双基因的载体构建及其在HT-29细胞的表达

摘要：

目的：研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达，同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA 片段，从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段，与APC功能片段（ aa1020-1698）相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组，慢病毒对HT-29进行侵染，观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot 检测 Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果①Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shR-NA3序列。②构建出的shRNA载体经过送序验证比对后，3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光，实验组Survivin相对含量（31．71±1．49）较空载组（100±0）、空白组（95．12±2．15）明显减少（P＜0．05），APC mRNA表达水平较空载组（0±0）、空白组（0．51±0．15）明显增加（P＜0．05）。实验组Survivin蛋白相对含量（0．18±0．01）较空白组（0．24±0．04）、空载组（0．22±0．03）明显减少，APC蛋白表达水平（0．147±0．016）较空白组（0．095±0．012）、空载组（0．108±0．015）明显升高（P＜0．05）。③实验组凋亡相对比值（0．573±0．050）较空白组（0．390±0．040）、空载组（0．407±0．030）明显增加（P＜0．05）。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体，并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达，该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。

关键词：HT-29、Survivin shRNA、APC有效片段、双基因、慢病毒

所属期刊栏目：29

分类号：Q343.17(遗传学分支学科)

资助基金：黑龙江省自然科学基金 H201368；佳木斯大学科研资助项目 L2012-051；2014年佳木斯大学研究生科技创新项目 LZR2014＿023；2015年佳木斯大学研究生科技创新项目LZZ2015＿018

在线出版日期：2016-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：369-374