MicroRNA Let-7b介导甲型流感突变型 PB1重组病毒的构建

摘要：

目的：疫苗是预防流感所致疾病的最有效方法，MicroRNA介导的基因沉默机制为构建新型疫苗提供了新思路。文中旨在构建包含装载有 miRNA Let-7b 结合靶位 PB1基因的甲型流感重组病毒。方法比对 A／Nanjing／108／2009H1N1的PA、PB1、PB2与let-7b的靶序列选定PB1基因为最优序列后，通过基因突变，插入Let-7b的结合靶位；构建pDP2000重组表达载体，设计pDP-mu-PB1，同时设计对照组pDP -sclb-PB1，并与其余7个质粒共转染MDCK细胞和293T细胞拯救病毒；留取上清接种鸡胚尿囊腔，血凝法检测病毒，TCID50检测病毒滴度；提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增病毒cDNA，通过琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列分析鉴定病毒。结果选择PB1片段最优序列（位置83 bp－107 bp），突变片段改变了3个氨基酸，同时有3个碱基不能与Let-7b靶序列配对；酶切鉴定重组质粒构建正确；重组病毒miRT（ miRNA target elements）-H1N1和scramble（scbl）-H1N1的血凝效价分别为1∶32和1∶64，病毒滴度为4．68×105 TCID50／mL和7．94×104 TCID50／mL；测序确认突变病毒包含目的片段。结论构建成功重组病毒株，为进一步的毒力评估实验奠定了基础。

关键词：H1N1流感、miRNA Let-7b、基因重组、反向遗传学

分类号：R186(流行病学与防疫)

资助基金：国家自然科学基金81270064，81200063

在线出版日期：2015-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：683-687