硫化氢调节 miRNA-455表达抑制内质网应激介导的心肌细胞凋亡

摘要：

目的：有研究表明硫化氢（hydrogen sulfide， H2S）能减少缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡，但确切机制不清。文中旨在研究心肌细胞缺氧／复氧（ hypoxia／reoxygenation ， HR）损伤中，H2 S能否通过调节miR-455的表达和减少内质网应激（ endoplasmic reticulum stress ， ERS）介导细胞凋亡发挥心肌保护作用。方法原代培养新生SD大鼠心肌细胞，建立心肌细胞HR模型。实验分组：对照组（心肌细胞正常培养27 h）；HR 组（将心肌细胞更换不含血清的DMEM液后进行HR处理）；H 2S 保护组[心肌细胞缺氧前30 min 给予40μmol／L的NaHS（ H2 S前体）预处理，其余处理同HR组]。采用MTT法检测细胞活力，全自动化学分析法检测培养液LDH漏出量，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率，RT-PCR法、蛋白印记法分别检测miR-455及ERS介导细胞凋亡信号通路的标志物葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78， Grp78）和caspase-12的mRNA、蛋白的表达。为检测miR-455是否参与H2 S抑制ERS介导的细胞凋亡，将心肌细胞又分为3组，阴性对照组（转染miR-455阴性对照片段24 h）；miR-455模拟剂组（转染miR-455模拟剂24 h），miR-455拮抗剂组（转染miR-455拮抗剂24 h），分别给予40μmol／L的NaHS预处理，再进行HR处理，检测Grp78、caspase-12的表达。结果与HR组比较，H2 S保护组可增加HR损伤的心肌细胞活力[（67．02±6．90）％vs （29．27±5．66）％， P＜0．05]，减少LDH漏出量[（91．33±10．63）U／L vs （168．17±15．38）U／L， P＜0．05]，同时降低细胞凋亡率[（13．98±1．90）％vs （24．31±2．79）％， P＜0．05]。与HR组比较，H2S保护组可降低HR损伤后细胞Grp78、Grp78 mRNA、caspase-12、caspase-12 mRNA的表达（ P＜0．05）。与阴性对照组比较，miR-455模拟剂组Grp78、Grp78 mRNA、caspase-12、caspase-12 mRNA表达显著升高，而miR-455拮抗剂组表达则显著下降（ P＜0．05）。结论 H2 S可通过调节miR-455的表达水平，减少HR损伤心肌细胞的ERS介导的细胞凋亡，发挥其对心肌的保护作用。

关键词：硫化氢、microRNA-455、内质网应激、凋亡、心肌细胞

分类号：R54(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金81100139；第二军医大学博士研究生创新基金BC201227

在线出版日期：2015-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1245-1249