重组铜绿假单胞菌外毒素A和pcrV基因质粒的构建及真核表达

摘要：

目的：外毒素A（ toxA基因编码）是铜绿假单胞菌毒力最强的因子之一，PcrV（ pcrV基因编码）是铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的关键调控因子之一。文中旨在构建重组toxA和pcrV基因的铜绿假单胞菌核酸疫苗，并在HEK-293细胞中表达目的蛋白。方法 PCR法从铜绿假单胞菌基因组基因中扩增出 toxA和pcrV基因，点突变法对toxA基因进行减毒优化，随后将突变的toxAm基因和pcrV基因分别插入pIRES真核表达质粒的2个多克隆位点，构建真核双表达重组质粒pIRES-toxAm-pcrV。脂质体法将pIRES-toxAm-pcrV瞬时转染入HEK-293细胞，通过Western blot检测toxAm及pcrV在真核细胞中的表达。结果构建的真核表达质粒pIRES-toxAm-pcrV，经脂质体转染HEK-293细胞后，在其细胞内检测到目的蛋白的表达。结论成功构建pIRES-toxAm-pcrV表达载体并在转染的真核细胞中得以有效的表达，为研究铜绿假单胞菌预防性疫苗奠定了实验基础。

关键词：铜绿假单胞菌、外毒素A、核酸疫苗、pcrV基因

分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：江苏省卫生厅面上项目H200911

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：694-697