人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达

摘要：

目的 人β-防御素4(human β-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用.HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵.利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点.文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性.方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究.结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同.将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达.荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光.Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4 转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达.Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用.结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽.

关键词：人β-防御素4、基因克隆、真核表达载体、基因转染

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：陕西省科技攻关项目2009K12-01

在线出版日期：2012-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1020-1023