人分化抑制因子3基因靶向微小分子RNA表达载体的构建及筛选

摘要：

目的 人分化抑制因子3(inhibitor of differentination 3, Id3)基因在A549细胞中的外源性表达能抑制细胞生长并诱导细胞凋亡.文中旨在构建靶向人Id3基因的微小分子RNA(miRNA)表达载体,观察miRNA对A549细胞中Id3表达的下调作用,为进一步探讨Id3基因在A549细胞生长调控中的作用机制提供一定实验依据. 方法 依据miRNA设计原则,针对人Id3基因的mRNA序列,设计并合成编码miRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体中,构建含靶向人Id3基因的miRNA表达质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3),DNA测序验证后,采用Lipofectamine2000TM脂质体转染技术将该质粒导入A549细胞.荧光倒置显微镜下观察miRNA干扰质粒转染A549细胞后EGFP的表达情况,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测miRNA干扰后Id3 mRNA及蛋白水平的表达. 结果 DNA测序表明重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3构建正确,将其成功导入A549细胞后,在Id3 mRNA水平和蛋白表达水平均有不同程度的抑制作用. 结论 成功构建了针对人Id3基因的4组pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3 miRNA表达载体,其中,SRId3-1干扰组在mRNA水平和蛋白表达水平均能有效抑制A549细胞Id3的表达.

关键词：微小分子RNA、人分化抑制因子3、肺腺癌、A549、RNA干扰

所属期刊栏目：23

分类号：Q752(分子遗传学)

资助基金：江苏省"科教兴卫"医学重点人才基金RC2007117;南京军区医药卫生科研项目重点课题07Z032

在线出版日期：2010-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：372-376