人高迁移率族蛋白组A1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建和鉴定人高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰慢病毒表达载体. 方法:针对已经筛选确定的HMGA1基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体(含U6启动子和绿色荧光蛋白)连接产生LV-sh HMGA1慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆.测序鉴定.用LV-sh HMGA1慢病毒载体、pHelper 1.0和pHelper 2.0等3种质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度. 结果:PCR和测序证实,成功构建LV-shHMGA1的慢病毒载体,病毒滴度达5×107TU/ml. 结论:人HMGA1基因RNA干扰慢病毒载体的成功构建为进一步应用RNAi技术研究HMGAl基因的功能打下了基础.

关键词：RNA干扰、高迁移率族蛋白组A1、慢病毒

所属期刊栏目：21

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：南京市医学发展重点项目基金资助ZKX0427;江苏省自然科学基金前期预研项目资助BK2005203

在线出版日期：2008-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：468-471,图版2