天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达

摘要：

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化.方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物.以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将所获阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot鉴定.最后用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化.结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白.结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.

关键词：天花粉蛋白、人类免疫缺陷病毒、定点突变、原核表达、纯化

所属期刊栏目：20

分类号：Q813.6(生物工程学(生物技术))

资助基金：陕西省科技计划2003K10G9

在线出版日期：2007-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：357-359,365