一氧化氮增强环磷酰胺对白血病细胞损伤效应的实验研究

摘要：

目的:观察体外培养条件下一氧化氮(NO)能否增强环磷酰胺对L1210细胞的损伤效应,并探讨其作用机制.方法:将不同的转染3T3细胞与L1210细胞进行共培养,DMEM培养液中加入终浓度为400μg/ml的环磷酰胺.根据接种的转染细胞不同分为三组:第1组为pcDNA3.0-iNOS转染的3T3细胞,第2组为pcDNA3.0转染的3T3细胞,第3组为pcDNA3.0-iNOS转染3T3细胞,并添加终浓度100μmmol/L的Caspase-3特异性抑制剂DEVD-CHO.分别采用锥虫蓝拒染试验和TUNEL试验,检测各组L1210细胞在不同培养时间的细胞成活率和凋亡率,同时利用流式细胞术分析各组L1210细胞的增殖状态.结果:①各组L1210细胞成活率随培养时间的延长均逐渐下降,第1组较第2组下降更快,从12 h开始两组差异已有显著性意义(P＜0.05);第3组的细胞成活率明显高于第1组,培养24 h开始差异有显著性意义(P＜0.05).②各组L1210细胞的凋亡率持续上升,第1组较第2组升高更快,从培养12h开始即差异有显著性意义(P＜0.05);第3组细胞凋亡率明显下降,从12 h开始即显著低于第1组(P＜0.05).③培养4 h时,各组L1210细胞中的G1期细胞百分率(G1%)显著升高,S期细胞百分率(S%)明显下降,第2、3组的G1%显著低于第1组(P＜0.05),S%显著高于第1组(P＜0.01、P＜0.05);培养8、12 h时,三组之间的G1%和S%均无明显差异;培养24 h后,第2、3组G1%开始下降,S%上升较快,第1组的G1%保持较高水平,S%持续较低(P均＜0.05).结论:NO可增强环磷酰胺对L1210细胞的直接损伤作用,促进细胞凋亡,使环磷酰胺对G1期细胞的阻滞作用更敏感、持续时间更长,上述作用可能与Caspase-3蛋白的活化有关.

关键词：一氧化氮、白血病、损伤效应、细胞凋亡、Caspase-3

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分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：南京军区总医院科研项目2004072

在线出版日期：2006-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：315-318