人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达

摘要：

目的:构建人源抗红细胞Rh(D)抗原单链噬菌体抗体库.方法:应用噬菌体展示技术,从分泌抗Rh(D)抗体的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,多次PCR扩增和克隆抗体可变区基因(VH/VLcDNA),经重叠延伸拼接(SOE)用编码连接肽(Gly4Ser)3的互补序列组成scFv基因,经酶切克隆入载体pCANTAB5E,使之呈现于噬菌体表面.使用完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,ELISA对所获抗体进行初步鉴定.结果:构建的噬菌体抗体库库容为1.2×107,噬菌体DNA中全长scFv基因的插入率为0.80,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为3×108pfu/m1的初级噬菌体抗体库.以完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,出现特异性富集.经Dot ELISA实验鉴定,得到1株与Rh+型红细胞特异结合的scFv噬菌体抗体.结论:运用噬菌体抗体库技术构建了人源抗红细胞Rh(D)抗原的噬菌体抗体库,为进一步对所获克隆株进行序列分析、可溶性抗体表达和纯化奠定了基础.

关键词：Rh(D)抗原、scFv基因、噬菌体展示技术

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院资助项目30471600;江苏省自然科学基金BK2003012

在线出版日期：2006-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：298-301,305