RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

摘要：

目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用.方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体.利用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干涉效果.结果:重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功地插入至预计位点,且序列与预期完全一致.稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用.结论:载体的成功构建并能对U87细胞中的MAGE-1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE-1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠定了基础.

关键词：pSUPER、短片段双链核糖核酸、核糖核酸干扰、MAGE-1、胶质瘤

所属期刊栏目：19

分类号：R730.264(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目39970752

在线出版日期：2006-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：292-297,彩插2