肽抗生素hPAB-β基因串联体的构建及原核细胞表达初探

摘要：

目的: 构建肽抗生素hPAB-β基因多拷贝串联体重组质粒,实现目的基因串联产物在大肠杆菌中的高效表达. 方法:以表达质粒pQE-32为载体,利用同裂酶Pst Ⅰ与Ava Ⅲ能产生相同粘端的特性,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等操作,构建含不同数目hPAB-β基因的串联体.对获得的重组菌用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达,Tricine-SDS-PAGE观察串联体融合蛋白的表达情况. 结果: 构建了一至八拷贝的串联体重组质粒,经酶切、DNA测序分析表明,各串联体的DNA序列及阅读框完全正确.Tricine 蛋白电泳显示,各串联体的阳性转化菌株经IPTG诱导后均能表达出目的融合蛋白,相对分子质量与预期结果相符,表达量占细菌总蛋白的10%～22%.但八拷贝较其他串联体表达率有所降低. 结论:hPAB-β基因串联体重组表达质粒的成功构建,为大量制备目的肽抗生素奠定了基础,并为其他小分子生物活性肽的制备提供了参考.

关键词：肽抗生素、串联体、构建、表达

所属期刊栏目：16

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：国家科学基金30171119;军队重点项目01Z070;国家高技术研究发展计划863计划2002A214211

在线出版日期：2004-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：884-887,890