表达促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞凋亡的影响

摘要：

目的 构建表达并分泌外源性促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌,并研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响.方法 运用生物信息技术对小鼠Bid蛋白质的理化性质、分泌属性、保守结构域及蛋白相互作用网络等进行分析,应用无缝克隆技术及传统酶切酶连方式构建pMV261-ASP(BamHI)-10His、pMV261-ASP(BamHI)-Bid-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-Bid-10His重组质粒,并电转化入耻垢分枝杆菌;通过BCA蛋白定量及免疫印迹技术分析蛋白表达情况,采用AnnexinV-FITC/PI双染法流式检测Bid重组耻垢分枝杆菌对RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的影响.结果 小鼠Bid蛋白是一种等电点为4.80的亲水性蛋白质,其中亮氨酸所占比例最高,为11.3％,色氨酸含量最低,为0.5％;二级结构中,α-螺旋(Hh)、无规则卷曲(Cc)、β-折叠(Ee)、β-转角(Tt)所占比例依次为65.13％、27.69％、4.10％、3.08％;Bid蛋白不具有跨膜结构域及信号肽,属于非分泌性蛋白质,具有死亡保守结构域,可与Caspase8、Bcl-2、Granzyme B等凋亡相关蛋白发生相互作用;本次构建的ASP-Bid重组耻垢分枝杆菌可以表达并分泌目标蛋白,且可增强RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的比例.结论 表达外源基因Bid的重组耻垢分枝杆菌可以促进巨噬细胞凋亡发生,这可为新型结核病预防疫苗的研发提供新的思路与技术.

关键词：结核病、耻垢分枝杆菌、信号肽、Bid、细胞凋亡

所属期刊栏目：35

分类号：R378.911(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：大理大学博士科研启动费项目;大理大学临床分子免疫学创新团队

在线出版日期：2023-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：41-49