人硫氧还蛋白治疗小鼠溃疡性结肠炎的药效学作用

摘要：

本研究旨在利用基因工程技术表达重组人硫氧还蛋白(recombinant human thioredoxin,rhTXN),并在葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型上验证其治疗效果.从Jurkat细胞的cDNA中克隆出人硫氧还蛋白基因TXN,采用限制性酶切法构建pColdTF-rhTXN重组表达质粒,在大肠杆菌中表达后,利用镍柱纯化、再通过酶切去除融合表达标签、获得完整的rhTXN重组蛋白,并用胰岛素还原法检测其二硫键还原酶活性.本研究中的动物实验是按照南京大学实验动物福利伦理审查委员会的伦理指导方针进行的.3％DSS自由饮用诱导小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,腹腔注射rhTXN,通过体重变化、结肠长度和苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色切片研究其治疗效果.利用活体成像研究rhTXN对DSS小鼠的靶向性.利用GEO数据库的GSE107499数据集筛选UC炎症部位的枢纽基因并研究与TXN的相关性.实验结果显示,具有活性的rhTXN成功表达和纯化,rhTXN(100 μg·kg1)在维持DSS小鼠体重变化(P=0.000 5)和减少肠道损伤上(P＜0.000 1)有显著治疗效果,并对DSS小鼠有结肠靶向性.GSE107499数据集中UC患者炎症部位TXN有极显著的下调(P＜0.01),并与枢纽基因CD40有极显著的负相关(尸＜0.01),与纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)有极显著的正相关(尸＜0.01).本研究成功制备出具有生物活性的rhTXN,并证明对DSS小鼠模型有较好的治疗效果,而TXN基因与UC枢纽基因CD40和FN1有显著相关性.

关键词：重组人硫氧还蛋白、蛋白纯化、溃疡性结肠炎、葡聚糖硫酸钠、枢纽基因

所属期刊栏目：57

分类号：R967(药理学)

资助基金：常州市科技局;常州市科技局;江苏省前沿引领技术基础研究专项

在线出版日期：2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1816-1824