RUNX3调控胃癌细胞对赫赛汀耐药的非标记定量蛋白质组学研究

摘要：

肿瘤耐药是多机制、多因子参与的复杂生物学过程,而肿瘤细胞抗凋亡是导致其耐药的重要原因.前期研究显示,Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)在胃癌赫赛汀耐药细胞中与DNA的结合活性显著增强,然而其活性变化是否与耐药有关,尚不明确.本实验以赫赛汀耐药细胞(NCIN87R)为对象,采用CRISPR/Cas9构建RUNX3敲除细胞株(△RUNX3/NCIN87R),探究RUNX3在赫赛汀耐药中的作用及其潜在机制.在此基础上,基于非标记定量蛋白质组学研究△RUNX3/NCIN87R细胞蛋白质表达谱;采用倍数变化及显著性水平筛选差异表达分子;利用GeneAnalytics数据库通路富集分析;使用DAVID Bioinformatics Resources数据库基因本体分析;基于STRING数据库构建蛋白-蛋白互作网络.结果表明,敲除RUNX3使NCIN87R细胞对赫赛汀的敏感性增加.蛋白质组数据显示,577种基因在△RUNX3/NCIN87R中的表达显著改变,其中上调191种、下调386种.根据通路富集率及显著性水平,自噬、细胞周期、凋亡、线粒体脂肪酸β氧化、神经源性位点notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,NOTCH1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、Hedgehog及DNA损伤响应信号变化显著(P＜0.05),表明敲除RUNX3干扰耐药细胞多条通路.免疫印迹证实,自噬相关蛋白(autophagy-relatedprotein,ATG)13、7及BECN1在△RUNX3/NCIN87R中的表达显著增加,而细胞周期调节分子丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Chk2(serine/threonine-protein kinase Chk2,CHEK2)及凋亡调节分子Bcl-2(apoptosis regulator Bcl-2,BCL2)显著下调;与NCI N87R细胞相比,磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(p-AKT)在△RUNX3/NCIN87R中的表达显著降低(P＜0.01),且赫赛汀能够降低p-AKT水平,表明敲除RUNX3改变了耐药细胞周期、增加赫赛汀对p-AKT的抑制作用,促进其自噬并诱导凋亡,提示RUNX3可能是逆转或降低胃癌赫赛汀耐药的潜在靶标.

关键词：Runt相关转录因子3、赫赛汀、耐药性、非标记定量蛋白质组学、自 噬、凋亡

所属期刊栏目：56

分类号：R966(药理学)

资助基金：四川省应用基础科研项目;南充市市校合作项目;川北医学院博士科研项目

在线出版日期：2021-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1953-1964