田蓟苷抗H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的作用机制研究

摘要：

本研究利用泛caspase抑制剂Z-VAD-FMK联合缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤建立大鼠H9c2心肌细胞程序性坏死模型,并考察田蓟苷抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制.采用CCK-8(cell counting kit-8)测定细胞活力;采用试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);Hoechst 33342/PI染色检测细胞死亡方式;采用 DCFH-DA、BBcellProbeTMM61 和JC-1探针依次检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)改变;ELISA 法检测细胞分泌肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)释放情况;分子对接技术锁定田蓟苷作用的分子靶标;Western blot检测相关蛋白表达.结果表明,与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞活力下降,程序性坏死率升高,LDH水平升高,SOD活性降低,ROS释放显著增多,mPTP开放,MMP降低,TNF-α、IL-1β以及IL-6水平升高,而田蓟苷则可剂量依赖性地改善这些因素变化.分子对接结果显示,田蓟苷可与钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)结合.Western blot结果显示,与对照组比较,模型组细胞p-CaMKⅡ和磷酸化混合系结构域样蛋白(phospho-mixed lineage kinase domain-like protein,p-MLKL)表达水平显著升高;与模型组比较,田蓟苷则使这些蛋白表达水平降低.上述结果表明,田蓟苷能够保护H9c2心肌细胞,可能通过抑制CaMKⅡ苏氨酸Thr287位点磷酸化,抑制mPTP开放,保护线粒体功能以阻止程序性坏死进行,对H/R损伤治疗新方法的研究具有潜在价值.

关键词：田蓟苷、心肌缺血再灌注损伤、程序性坏死、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、线粒体膜通透性转换孔

所属期刊栏目：56

分类号：R966(药理学)

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金;新疆维吾尔自治区公益性科研院所基本科研业务费专项

在线出版日期：2021-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1070-1078