五味子2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因的克隆及表达分析

摘要：

2-酮戊二酸依赖性双加氧酶(2-oxoglutarate-dependent dioxygenase,2-ODD)是芳基萘类木脂素-鬼臼毒素合成途径的关键酶.为深入解析Sc2-ODD基因的表达及其功能,本研究克隆了五昧子Sc2-ODD基因,并进行生物信息学分析、果实发育期基因表达特征分析、原核表达载体构建、蛋白诱导与纯化研究.五味子Sc2-ODD基因ORF全长1 077 bp,编码358个氨基酸,蛋白分子质量40.16 kD,具2OG-FeII_Oxy结构域;系统进化显示Sc2-ODD与长蒴黄麻2-ODD亲缘关系较近;qRT-PCR结果显示Sc2-ODD表达量呈现果实膨大期快速增加而进入着色期迅速降低的变化趋势;将Sc2-ODD基因插入到原核表达载体,并构建pGS21T-Sc2-ODD重组表达载体,转化Rosetta (DE3),经诱导表达获得大量融合蛋白,利用GST融合蛋白纯化技术对融合蛋白进行纯化,获得高纯度可溶性重组蛋白.研究结果为进一步研究Sc2-ODD基因在五味子芳基萘类木脂素代谢中的分子调控机制提供依据,从而为利用基因工程提高五味子芳基萘类木脂素含量并最终提升五味子药材品质奠定基础.

关键词：五味子、Sc2-ODD、基因克隆、qRT-PCR、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：55

分类号：R282.12(中药学)

资助基金：全国中药资源普查项目1102-01042918001

在线出版日期：2020-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2226-2233