二氢杨梅素调控MAPKs信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡和迁移的分子机制研究

摘要：

研究二氢杨梅素(ampelopsin,AMP)在体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和抑制细胞迁移的作用,并初步探讨其分子机制.用不同浓度的AMP处理SMMC-7721细胞,采用CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖情况;倒置显微镜下观察细胞形态改变;DAPI染色检测细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell和细胞划痕愈合实验检测细胞的迁移和转移能力;运用Western blot法检测相关蛋白.结果 表明,AMP对肝癌SMMC-7721细胞具有显著的增殖抑制及凋亡诱导作用,24 h的半数有效抑制浓度(IC50)为38.98 μg·mL-1;SMMC-7721细胞发生典型的凋亡形态改变,细胞贴壁性差,细胞皱缩,变圆,细胞核出现高亮的蓝染区;50 μg·mL-1AMP处理SMMC-7721细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,从15％增加到55.1％;对凋亡相关蛋白PARP (poly ADP-ribose polymerase)分析发现,AMP处理SMMC-7721细胞后,PARP出现切割条带,且随着AMP剂量的增加,切割条带显著增强;细胞划痕愈合实验发现AMP能抑制细胞的迁移能力;Transwell实验证实AMP能够显著抑制穿膜细胞数,降低细胞的侵袭能力;检测基底膜降解关键蛋白酶发现,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和9的表达量均减少;进一步分析细胞EMT相关蛋白发现,50 μg·mL-1AMP作用24 h后,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调,N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达下调;MAPKs家族ERK在AMP处理1h后达到峰值,JNK的最大活化时间在12h,而P38在4h内被AMP激活,2h磷酸化水平最高,4h后AMP反而抑制了P38的磷酸化,抑制作用一直持续到24 h,并且AMP对MAPKs家族蛋白的激活具有浓度依赖性.可见,AMP不仅有效抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡,还能显著降低其迁移和侵袭能力,并提示其作用机制可能与激活MAPKs信号通路与逆转肿瘤细胞EMT有关,这为AMP的抗肝癌治疗作用和解析其具体分子机制提供新的思路和理论依据.

关键词：二氢杨梅素、细胞凋亡、细胞迁移、SMMC-7721细胞、MAPKs信号通路

所属期刊栏目：54

分类号：R966(药理学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;安徽省大学生创新创业训练计划;安徽省大学生创新创业训练计划;活性生物大分子研究安徽省重点实验室项目;安徽省高等学校自然科学研究项目;安徽省高等学校自然科学研究项目;安徽省高等学校自然科学研究重点项目;安徽省高等学校自然科学研究重点项目;安徽省优秀青年人才支持计划重点项目;皖南医学院重点科研培育项目

在线出版日期：2019-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1431-1438