甲基莲心碱通过影响微小RNA抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制研究

摘要：

本文以鼻咽癌CNE-1和5-8F细胞为研究对象,检测甲基莲心碱(neferine,Nef)抑制鼻咽癌侵袭转移的作用,探讨其抑制侵袭转移的机制.CCK-8法检测鼻咽癌细胞活性;划痕实验、Transwell细胞体外迁移侵袭实验观察Nef对鼻咽癌CNE-l、5-8F细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blot法检测上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及其转录因子表达水平;miRNA基因芯片检测Nef处理过的5-8F细胞与对照组miRNA差异基因表达谱,对差异表达基因进行生物信息学分析及筛选,同时研究其表达与鼻咽癌侵袭转移的相关性.实验结果显示:30 μmol·L-1 Nef对鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞活性无明显影响,Nef能显著抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移,Western blot结果显示Nef使鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞中神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调,Twist、Snail、Slug转录因子无显著表达差异;miRNA基因芯片结果显示Nef作用后的5-8F鼻咽癌细胞与对照组相比共10个miRNA有2倍以上表达差异,其中hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p表达差异最显著,分别下调至30.6％、28.6％.生物信息分析显示hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p有共同的下游靶基因:小细胞膜蛋白3 (small integral membrane protein 3,SMIM3)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF).鼻咽癌5-8F细胞转染hsa-let-7c-5p mimic与hsa-miR-423-5p mimic后增强其侵袭与转移能力,SMIM3、NGF表达下调.以上研究结果表明,Nef可能通过抑制hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p的表达,作用于下游靶基因SMIM3、NGF,抑制EMT相关蛋白的表达,从而抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移.研究结果为Nef抑制肿瘤侵袭转移提供实验依据.

关键词：甲基莲心碱、鼻咽癌、侵袭转移、作用机制

所属期刊栏目：54

分类号：R966(药理学)

资助基金：中南大学湘雅三医院“新湘雅人才工程”资助项目JY201617;湖南省自然科学基金资助项目13JJ3035

在线出版日期：2019-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1417-1423