丹参茉莉酸甲基转移酶蛋白表达和纯化的研究

摘要：

茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是茉莉酸生物合成途径中的关键酶,能够催化茉莉酸甲基化形成茉莉酸甲酯.本研究将丹参茉莉酸甲基转移酶基因(SmJMTl) cDNA构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21 (DE3)并诱导表达.SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约66 kDa,与预测的蛋白分子质量相同;同时对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明当诱导前菌液的A600在0.8左右时,加入0.4 mmol·L-1IPTG,20℃诱导培养8h后SmJMTI蛋白的表达量较高.蛋白质印迹检测显示,anti-GST抗体可以特异性地识别SmJMT1蛋白,证实丹参SmJMT1蛋白在大肠杆菌中表达成功;Q-TOF检测数据检索分析表明,SmJMT1蛋白属于甲基转移酶亚家族.丹参中茉莉酸甲基转移酶SmJMT1的成功表达和纯化对研究茉莉酸生物合成途径及茉莉酸对药用植物次生代谢调控奠定了一定基础.

关键词：丹参、茉莉酸甲基转移酶、蛋白表达纯化、蛋白质印迹、Q-TOF

所属期刊栏目：51

分类号：R931(生药学（天然药物学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2016-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1643-1650