人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶在酿酒酵母中的表达、定位及功能研究

摘要：

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,转化酿酒酵母INVSc1,获得了重组菌INVSc1-DS和INVSc1-DS-GFP.通过差速离心法制备重组菌微粒体,荧光显微镜下观察达玛烯二醇-Ⅱ合酶的表达及亚细胞定位,并通过酶促反应对该酶进行了功能鉴定,结果表明,DS为膜结合型蛋白,在体外能催化2,3-氧化鲨烯生成达玛烯二醇-Ⅱ.对重组菌发酵产物进行分析,结果表明,重组菌中产生了达玛烯二醇-Ⅱ,且通过将ds与gfp融合,重组菌中的达玛烯二醇-Ⅱ产量由7.53 mg·g-1提高到12.24 mg·g-1,该结果为优化在酿酒酵母中构建的人参皂苷代谢途径提供了新思路.

关键词：达玛烯二醇-Ⅱ合酶、绿色荧光蛋白、融合表达、酿酒酵母

所属期刊栏目：51

分类号：R931(生药学（天然药物学）)

资助基金：北京市自然科学基金;天然药物活性物质与功能国家重点实验室自主课题

在线出版日期：2016-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：998-1003