基于RNA干扰技术的外排转运体体外模型及评价

摘要：

为建立多药耐药相关蛋白2 (MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的体外RNA干扰模型,应用化学合成的siRNA转染HepG2细胞,并用实时PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达变化,应用MRP2和P-gp底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功.siRNA筛选结果显示,MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2能够显著地抑制MRP2或P-gp的mRNA表达,抑制率分别为68％和84％;MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够明显地抑制MRP2或P-gp的蛋白表达,抑制率分别为62％和70％,同时不影响其他转运蛋白的表达;给予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育,发现MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度,表明其外排受到抑制.以上结果表明利用化学合成的siRNA能够显著地抑制细胞MRP2和P-gp的表达和功能,提示细胞干扰模型建立成功.

关键词：RNA干扰、小干扰RNA、P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白2

所属期刊栏目：50

分类号：R963(药理学)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后科学基金;重大新药创制"科技重大专项;重大新药创制"科技重大专项

在线出版日期：2015-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1122-1127