基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立

摘要：

利用Jurkat/NFAT-luc+ FcγRⅢa转基因细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay System)进行抗CD20单抗的ADCC生物学活性检测,并对实验条件进行优化及方法学验证.结果显示抗CD20单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/”1+(X/C)B”+D.方法经优化确定靶细胞为WIL2-S细胞,抗体稀释浓度为18 000 ng·mL-1,1:5倍的稀释倍数,效靶比为6∶1,诱导时间为6h.该方法具有良好的专属性,8次独立实验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(44.39±3.93)％、(72.74±2.78)％、(128.28±7.01)％和(168.19±2.70)％,变异系数均小于10％,对应回收率分别为(88.78±7.85)％、(96.99±3.70)％、(102.63±5.61)％和(112.12±1.80)％.本研究利用转基因细胞法成功建立抗CD20单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗CD20单抗ADCC生物学活性的常规检测方法.

关键词：抗CD20单克隆抗体、ADCC、生物学活性

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目2014ZX09304311-001,2012ZX09304010;中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金资助项目2012B6.

在线出版日期：2015-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：94-98