三七病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析
在生物信息学分析基础上,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从三七中获得病程相关蛋白1(pathogensis-related protein 1,PRI)基因的开放阅读框,命名为PnPR1,测序结果显示该序列长501 bp,编码166个氨基酸,其蛋白质分子质量为18.1 kD.利用NCBI/Blastp和BioEdit软件进行同源性比对显示,PnPR1基因编码蛋白与葡萄、烟草、番茄等高等植物中的PR1蛋白同源性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白的保守结构域.将构建的重组载体pET28a(+)-PnPR1在宿主菌Escherichia coli BL21中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,在不同诱导时间、诱导温度、IPTG诱导浓度和IPTG添加时间下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,PnPR1基因编码蛋白的最佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4 mmol·L-1、IPTG添加时间为转接后4h、诱导温度28℃、诱导时间20 h.这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备奠定了一定的基础.
三七、病程相关蛋白、生物信息学分析、原核表达、条件优化
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R931(生药学（天然药物学）)
国家自然科学基金资助项目81130070,81173490
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
124-130
