单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化

摘要：

优化以包涵体形式表达的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白Fv-LDP制备过程.通过单因素或正交设计优化其包涵体制备与溶解、固定化金属螯合层析和分步透析复性过程,Sephadex G-75层析精细纯化蛋白,基于流式细胞术的饱和结合实验检测其抗原结合活性.优化后,Fv-LDP包涵体纯度为63.9％,溶解度为95.7％;纯化后Fv-LDP纯度达95％以上,复性后单体含量占60％,精细纯化后提升为85％,比初始复性条件提高5.6倍,能够与人肺腺癌PAa细胞和肝癌BEL-7402细胞结合.Fv-LDP制备过程被成功优化,为其生产和研发奠定了实验基础,也为其他以包涵体形式表达的基于单链抗体的小型化抗体药物制备提供了比较实用的方法.

关键词：包涵体、Ⅳ型胶原酶、融合蛋白、纯化、复性

所属期刊栏目：48

分类号：R963(药理学)

资助基金：国家"重大新药创制"科技重大专项2009ZX09103-136,2013ZX09102064;国家自然科学基金资助项目81001021

在线出版日期：2013-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1563-1569